人纖維肉瘤細胞HT-1080的形態學觀察及鑒定:細胞換液后直接在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態及生長特征,并作相差攝影,同時進行常規HE染色觀察并攝片。鑒定采用DAB免疫組織化學法,在6孔培養板中放置載玻片,在玻片上植入2ml含有1×106的細胞懸液,待細胞貼壁后,取出載玻片,放入-20℃的冷丙酮中固定30min,用PBS沖洗3次,每次2min,滴加3%H2O2室溫孵育10min,PBS沖洗3次,每次2min,以消除內源性過氧化物酶的活性。滴加兔抗人Ⅷ因子相關抗原多抗工作液,放入濕盒內4℃過夜,同時另一蓋玻片不加一抗作陰性對照。次日,用PBS沖洗3次,每次2min,滴加辣根酶標記的羊抗兔IgG,37℃孵育30min,用PBS沖洗3次,每次2min,用DAB底物混合工作液顯色,顯微鏡下觀察,待出現特異性染色后,終止顯色,進行復染,脫水,透明,封片,相差顯微鏡下觀察攝影。
人纖維肉瘤細胞HT-1080的培養:
1.取出小鼠后瀝干酒精,放入超凈臺內,固定在泡沫板上。
2.用鑷子提起皮膚,用解剖剪剪開皮膚一個橫切口,將皮膚向上撕開,然后剪開肌肉等,暴露出腹腔,在左側找到脾臟,用彎頭YK鑷取出脾臟,置于無菌培養皿中。
3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次,并剔除多余無用的組織。
4.將篩網置于平皿中,脾臟置于篩網上,用彎頭鑷鑷住,輕輕在篩網上進行碾磨,同時不停滴加不含血清的培養液沖洗。
5.將碾磨好的細胞懸液吸入至離心管中,離心(1000rpm,5min),吸去上清(去除血液等)。
6.加入10ml培養液,吹打混勻,取樣計數。
7.將稀釋好的細胞懸液分裝于培養瓶中,輕輕搖晃混勻,在培養瓶上。