人子宮頸鱗癌細胞SiHa貼壁細胞接收后的操作流程與注意事項:
1.收到細胞當天盡快更換新鮮培養基,第二天再進行消化處理
2.如果細胞收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態,請將懸浮的細胞即時離心,加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶繼續培養觀察。同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的培養基,培養觀察
3.若出現生長不均:貼壁細胞若出現分布不均,成島狀生長,可將細胞進行消化,重懸打散細胞,加入新鮮培養基進行培養
人子宮頸鱗癌細胞SiHa貼壁細胞常規培養傳代流程(請嚴格遵照無菌操作):
1.吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加適量0.25%胰酶進行消化細胞(注意把握消化時間)
2.鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂?。┤サ粢让福?~8ml培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散
3.取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養
4.注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項作或者凍存
人子宮頸鱗癌細胞SiHa的傳代方法:
1.盡量吸干凈T25瓶原培養基;
2.加3-4ml常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s,吸走潤洗的PBS;
3.T25瓶加1ml左右胰酶,輕輕晃動培養瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層;
4.將培養瓶放入37度培養箱消化;
5.消化到細胞間隙變大,但未脫落時加2-3ml培養基終止胰酶消化;
6.混勻細胞,900rpm離心3-5min,棄上清;
7.加新的培養基輕輕重懸細胞,均勻分到新的培養瓶里;
8.補足培養基,將培養瓶放回培養箱靜置培養;