1）凍存細胞的復蘇：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：
1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。
3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
人非小細胞肺癌細胞A549使用注意事項
1.實驗前應檢查細胞的穩定性，確保細胞的純度和活性。
2.實驗中應使用無菌技術，以避免外界污染對實驗結果的影響。
3.使用培養基時應嚴格按照廠家說明書的要求制備，保證培養基的質量。
4.A549細胞應在體外培養，并在合適的溫度（37℃）和濕度（5%CO2含量）下進行實驗。
5.建議使用合適的細胞培養基，例如DMEM/F12，RPMI1640等。
6.需要注意細胞的傳代，細胞傳代時必須在適當的細胞密度下移植細胞，以避免過度生長和細胞間的相互作用。
7.確保試劑的穩定性和儲存條件，以保證實驗的準確性和重復性。
8.需要預先準備藥物濃度和時間等相關信息，以確保實驗的可重復性和較好的控制。
9.進行實驗時應盡量減少操作時間，以避免對細胞活性的影響。
10.應盡可能避免使用有毒物質及危險試劑，保證實驗的安全性。
