LNCap人前列腺癌細(xì)胞

簡(jiǎn)要描述：LNCap人前列腺癌細(xì)胞介紹：
種屬：人；貼壁生長(zhǎng)；生長(zhǎng)周期：3~4天
人前列腺癌細(xì)胞LNCaP Clone FGC，是1977年從一位50歲白人男性（血型B+）的左鎖骨淋巴結(jié)針刺活檢中分離的，當(dāng)時(shí)該患者已確診為轉(zhuǎn)移性前列腺癌。根據(jù)報(bào)道，該細(xì)胞對(duì)5-α-二氫睪酮（生長(zhǎng)調(diào)節(jié)并生成酸性磷酸酶ACP）有響應(yīng)。

產(chǎn)品型號(hào)： YKLLNCap

所屬分類(lèi)：細(xì)胞庫(kù)

更新時(shí)間：2024-04-30

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LNCap人前列腺癌細(xì)胞介紹：

種屬：人；貼壁生長(zhǎng)；生長(zhǎng)周期：3~4天

細(xì)胞傳代方法：1：2傳代。

細(xì)胞形態(tài)特性：上皮樣；梭形。

有一些細(xì)胞是數(shù)量多一點(diǎn)比較好生長(zhǎng)，生長(zhǎng)狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞。譬如內(nèi)皮細(xì)胞。而有一些是細(xì)胞是數(shù)量少一點(diǎn)細(xì)胞狀態(tài)會(huì)生長(zhǎng)的比較好，譬如巨噬細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞。尤其是巨噬細(xì)胞，生長(zhǎng)速度非常得快，貼壁速度很快，所以傳代時(shí)就應(yīng)該留很少量的細(xì)胞，這樣細(xì)胞狀態(tài)會(huì)比較好。并且巨噬細(xì)胞比較喜歡扎堆生長(zhǎng)，而堆與堆之間是有空間的。如果長(zhǎng)成相連在一起的一滿(mǎn)片的時(shí)候，細(xì)胞形態(tài)基本上就會(huì)差了，老化的會(huì)比較多，對(duì)后期實(shí)驗(yàn)結(jié)果是不好的。所以在養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候應(yīng)該摸索該細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)空間密度問(wèn)題。這個(gè)其實(shí)是有一個(gè)方法可以改善的。對(duì)于貼壁細(xì)胞，如果細(xì)胞形態(tài)不好，（或者細(xì)胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等）可以在傳代的時(shí)候進(jìn)行如下操作：

先倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無(wú)血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培養(yǎng)基，進(jìn)行預(yù)吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過(guò)一遍，然后吸走。這時(shí)侯再開(kāi)始正式的消化、吹打。（巨噬細(xì)胞建議只吹打，不消化）其次，把吹打下來(lái)的細(xì)胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，按時(shí)間點(diǎn)觀察細(xì)胞貼壁情況。10分鐘觀察一次，20分鐘，30分鐘觀察一次。選擇一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，已經(jīng)有部分細(xì)胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺(tái)，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況以及形態(tài)。通常稱(chēng)之為“二傳”。如果一次效果還不理想，可重復(fù)多次。直到找到細(xì)胞上乘形態(tài)。其中要注意，結(jié)合細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)情況。喜歡多一點(diǎn)數(shù)量長(zhǎng)得好的細(xì)胞你就等貼壁細(xì)胞比較多點(diǎn)的時(shí)候再傳。反之亦然。

Lncap Cell細(xì)胞背景資料：該細(xì)胞由HoroszewiczJS于1977年從一名50歲的明確診斷為轉(zhuǎn)移性前列腺癌的白人男性患者的左鎖骨上淋巴結(jié)細(xì)針穿刺的活體組織中分離建立的。

LNCap人前列腺癌細(xì)胞凍存的步驟：

1）選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，在凍存前一天建議換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉，用0.25%YDBM消化。適時(shí)去掉YDBM，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞，使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,10鐘)；

2）去上清液，加入含20%小牛血清的培養(yǎng)基，于4℃預(yù)冷15分鐘后，逐滴加入已無(wú)菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，細(xì)胞濃度為5*106～1×107/mL之間。(凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具體要看培養(yǎng)的細(xì)胞類(lèi)型來(lái)選擇；

3）將分裝上述細(xì)胞懸液于2ml凍存管中，每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊，并標(biāo)記好細(xì)胞名稱(chēng)和凍存日期，同時(shí)作好登記(日期、細(xì)胞種類(lèi)及代次、凍存支數(shù))；

4）將裝好細(xì)胞的凍存管放到凍存盒中，-80℃冰箱過(guò)夜。如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過(guò)夜，放入液氮罐)或者可以在4℃，2h；然后轉(zhuǎn)到-20℃，2h；-80℃，2h；放入液氮罐；

5）細(xì)胞凍存在液氮中可以長(zhǎng)期保存，但為妥善起見(jiàn)，凍存半年后，最好取出一只凍存管細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察生長(zhǎng)情況，然后再繼續(xù)凍存。