基本培養條件:

培養基：90％DMEM +10％胎牛血清

溫度：         37℃

         氣相：95％空氣，5%二氧化碳

2.細胞運輸：

本細胞為貼壁細胞，常規運輸方式是將細胞在培養瓶中培養至狀態良好后灌滿新鮮的培養液并封好瓶口進行運輸。

根據氣溫的高低及運輸距離的遠近，我們可能采取以下兩種方式運輸。

活細胞YM消化離心后血清發貨；

凍存管發貨。

3.客戶收到細胞后請嚴格按照以下要求進行操作。

3.1培養前的注意事項：
A. 細胞出庫前都是生長良好,我們會對出庫細胞進行拍照留檔(建議用戶在收到細胞時拍照片,細胞拍照時請用100X 、200X倍數各拍上2~3張照片留存,可用作細胞狀態的對比,拍攝的照片應當清晰)。

B. 用戶在收到細胞后,先觀察培養瓶是否完好,培養液是否外滲,培養液是否渾濁。

3.2新購細胞的初步培養：

客戶收到細胞后在未開封前,先用75％酒精將培養瓶外表擦拭干凈,鏡檢細胞貼壁情況。將細胞置于培養箱中進行1-2小時的緩沖，待細胞恢復基本生長狀態后，進行后續細胞實驗。

細胞恢復基本生長狀態后，倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

A. 細胞密度未達85％時，用75％酒精噴灑培養瓶后放在生物操作臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸取剩余培養液，只留6~8ml培養液繼續培養。

B.細胞長滿（達85-95％），即可進行傳代。

3.3細胞培養：

A.細胞密度未達85％時，5~8ml培養液繼續培養。

B.培養基營養耗盡時，需及時換新鮮培養基；

C.細胞長滿（達85-95％），即可進行傳代。

傳代參考步驟如下：

a.棄去培養液，用無鈣鎂D-PBS洗滌1-2次

對于T25培養瓶來說，加入2-3ml 0.25%的YM-EDTA消化液，置b.37℃消化，并不時用顯微鏡觀察細胞消化情況，如細胞回鎖變圓、透亮、輕拍瓶壁呈流沙樣脫落，則迅速回操作臺，加入6-8ml含10％血清的培養液，終止消化并輕輕吹打細胞，使其變成單細胞懸液。

將細胞收集于離心管中以c. 80g-120g離心力離心2-5min，棄上清 , 輕彈管底 , 將細胞混懸于殘留上清中。

d.加入新鮮培養液重懸細胞，進行傳代、凍存；

e.如果沒有特別說明，收到的細胞第一次傳代比例為1:2，后期可按1：4-1：6的比例傳代。

3.4細胞觀察：

A、觀察細胞密度做好用（4X物鏡）低倍鏡觀察，以便正確的判斷細胞密度細胞。

B、觀察細胞形態請用（10X或20X）高倍鏡觀察。

3.5細胞保存：

凍存配方：70％基礎培養液+20％胎牛血清+10％DMSO

保存條件：液氮保存

3.6注意事項：

A、瓶中運輸的培養液我們建議保留培養一代后，傳代后分別用客戶自己的培養基和運輸培養基分別培養一瓶。以防止細胞不適應客戶自用的培養基而造成狀態不好或細胞死亡。

B、如發現細胞貼壁不牢，有少量脫落，可離心運輸用培養基，將細胞離心下來，混懸后接種到原瓶內；