培養細胞的凍存及復蘇：細胞低溫凍存是培養室常規工作和通用技術。細胞凍存在-196℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融?！緝龃婕毎?)選對數增生期細胞(證明無支原體污染)，在凍存前1d換液；2)按常規方法把培養細胞制備成懸液，計數，使細胞密度達5×10／ml左右密度，離心，去上清；3)加入配制好的凍存液(培養液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml)，按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養液中加入保護劑10％二甲基亞砜(DMSO)或甘油，可使冰點降低，使細胞內水分在凍結前透出細胞外；4)分裝于無菌凍存管中，每管加1.5m懸液；5)旋好凍存管并仔細檢查，一定要蓋緊，做好標記；6)凍存：在特殊的儀器或簡易的液氮容器中，按-1℃／min的速度，在30～40min時間內，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度，過快能影響細胞內水分透出，太慢則促進冰晶形成。操作時應戴防護眼鏡和手套，以免液氮凍傷?！緩吞K細胞】1)從罐中取出凍存管；2)迅速放入36℃～37℃水浴，不時搖動，使其急速融化，30～60s內完成；3)凍存管用70％酒精擦拭消毒后，打開蓋子，用吸管將細胞懸液注入離心管中，再滴加10ml培養液；4)低速離心(500～1000r／min) 5min，去上清后再用培養液洗一次；5)用培養液適當稀釋后，裝入培養瓶37℃培養，次日更換一次培養液后，繼續培養。以后仍按常規進行培養。凍存細胞數量要充分，密度應達到10／ml，在融后稀釋20倍時，仍能保持5×10／ml數量。

細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

HuH-7細胞：人肝癌細胞

細胞傳代方法：消化3-5分鐘。1：2。3天內可長滿。

傳代培養及其操作步驟：原代細胞培養成功以后，需要進行分離培養，否則細胞會因生存空間不足或密度過大，營養障礙，影響細胞生長。細胞由原培養瓶內分離稀釋后傳到新的培養瓶中培養的過程稱之為傳代培養。傳代細胞允許培養的細胞擴增(形成細胞株)，可以進行細胞克隆，易于保存，但可能喪失一些特殊的細胞和分化特征。傳代細胞形成細胞株的最大利處在于提供了大量持久的實驗材料，便于實驗。傳代細胞培養操作步驟：1)吸掉或倒掉培養瓶內舊培養液；2)向瓶內加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養瓶底為宜；3)置37℃孵箱或室溫(25℃溫度)下進行消化，2-5min后把培養瓶放在倒置顯微鏡下進行觀察，當發現胞質回縮、細胞間隙增大后，應立即中止消化；4)吸出消化液，向瓶內加入Hanks液少量，輕輕轉動培養瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養液，終止消化；5)使用彎頭吸管，吸取瓶內培養液，按順序反復輕輕吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔，以防用力過猛損傷細胞；6)用計數板計數后，分別接種于新的培養瓶中，置CO2培養箱中進行培養；7)細胞培養換液時間應根據細胞生長的狀態和實驗要求來確定。一般2-3d后應換一次生長液。待細胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續傳代擴大培養或換成維持液。